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實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

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如何規(guī)劃PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

作者： 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)發(fā)表時(shí)間：2018-09-29 11:15:31瀏覽量：5936【小中大】

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文本標(biāo)簽：PCR 實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃，實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)要求,實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)

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　　標(biāo)準(zhǔn)PCR實(shí)驗(yàn)室分為四個(gè)區(qū)域，即：

PCR 實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃設(shè)計(jì)

　　N1。試劑準(zhǔn)備區(qū)；
　　N2。樣品加工區(qū)；
　　N3。核酸擴(kuò)增區(qū)；
　　N4。產(chǎn)品分析區(qū)；
　　如果使用全自動(dòng)分析儀，則可以適當(dāng)?shù)亟M合區(qū)域。 （進(jìn)入每個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格按一個(gè)方向，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服，如不同的顏色。工人離開工作區(qū)時(shí)不應(yīng)帶出工作服）
　　PCR實(shí)驗(yàn)室布局
　　[各地區(qū)的職能分別為]
　　試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的制備、包裝和貯存
　　樣品處理區(qū)：樣品注冊、子包；核酸提取、保存和加載
　　擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定、結(jié)果分析、注冊和報(bào)告
　　預(yù)擴(kuò)增區(qū)和后擴(kuò)增區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開，并且必須使用不同的房間。最好在兩個(gè)區(qū)域之間有一定的間隔。
　　使用商業(yè)試劑盒在樣品處理區(qū)域中制備小試劑
　　樣品處理區(qū)域和試劑制備區(qū)域可以位于同一房間，只要滿足以下操作和清潔要求：
　　在生物安全柜中操作；
　　每個(gè)實(shí)驗(yàn)者、實(shí)驗(yàn)組使用各自的試劑和消耗品；
　　將含有污染物的容器密封并使用一次；
　　實(shí)驗(yàn)前后對操作區(qū)域和共用設(shè)備進(jìn)行有效清潔和消毒。
　　PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)規(guī)劃要點(diǎn)
　　1、主要結(jié)構(gòu)：
　　主體是彩鋼板、鋁合金型材。房間的所有內(nèi)角、正角均由鋁合金50圓形鋁制成，這解決了容易污染的問題、灰塵、難以清潔等問題。結(jié)構(gòu)牢固，線條簡潔，外形美觀，密封性好。
　　2、標(biāo)準(zhǔn)三區(qū)分離和氣壓調(diào)節(jié)：
　　PCR過程分為試劑制劑。在三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)中進(jìn)行、樣品制備和PCR擴(kuò)增測定。整個(gè)地區(qū)都有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)都設(shè)有一個(gè)緩沖區(qū)，每個(gè)區(qū)域都受氣壓調(diào)節(jié)，從而在整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過程中保護(hù)試劑和標(biāo)本免受氣溶膠污染，減少了對人和環(huán)境的擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。
　　緩沖器I可以打開，緩沖器II的排氣扇和PCR放大區(qū)域在外面排出，可調(diào)節(jié)風(fēng)量的出風(fēng)口安裝在實(shí)驗(yàn)區(qū)和每扇門的外壁上，空氣通風(fēng)在室內(nèi)通過回風(fēng)口。 。3、消毒：
　　紫外燈安裝在三個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域和三個(gè)緩沖區(qū)的頂部，并在傳輸窗口內(nèi)進(jìn)行消毒。
　　在試劑制備區(qū)域和樣品制備區(qū)域中還提供移動(dòng)的紫外燈，以對實(shí)驗(yàn)臺(tái)進(jìn)行部分消毒。
　　4、機(jī)械鏈不銹鋼傳遞窗：
　　試劑和樣品通過機(jī)械互鎖不銹鋼（不建議用于電子聯(lián)鎖）進(jìn)行交付，以確保試劑和樣品在轉(zhuǎn)移過程中不被污染（個(gè)人分流）
　　5、地
　　建議使用PVC盤繞地板或自流動(dòng)地板以獲得良好的地面。易于清潔和耐腐蝕。水磨石地板也可以無條件地使用，或者大塊瓷磚（至少800 mm x 800 mm）接縫需要小于2 mm。
　　6、照明
　　燈具應(yīng)清潔光滑，可達(dá)到易于清潔的特點(diǎn)、無塵。
　　注意施工過程
　　●標(biāo)準(zhǔn)化的安裝流程和全面的服務(wù)流程
　　●嚴(yán)格遵循科學(xué)設(shè)計(jì)的安裝流程。
　　●安裝前，需要確定以下安裝條件，如：電源電壓，電源線位置，電話網(wǎng)線入口位置，進(jìn)水壓力，最小安裝空間，地面，通風(fēng)孔、進(jìn)水管和下水管位置等。理想的空間大小和通風(fēng)口的大小。
　　設(shè)計(jì)要點(diǎn)
　　PCR實(shí)驗(yàn)室可以是分散形式或組合形式。完成一組PCR實(shí)驗(yàn)，通常通過試劑制備、樣品處理、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析四個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟，如果實(shí)驗(yàn)過程需要，還應(yīng)增加樣品破碎過程。
　　一個(gè)、分散形成PCR實(shí)驗(yàn)室
　　所謂的分布式PCR實(shí)驗(yàn)室是指完成上述實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)室彼此相距很遠(yuǎn)并且處于分布式排列。對于這種類型的PCR實(shí)驗(yàn)室，不需要特殊條件，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)不容易相互干擾。
　　兩個(gè)、組合形成PCR實(shí)驗(yàn)室
　　所謂組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室是指完成PCR的四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)室彼此相鄰排列以形成獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)域的形式。對于組合式PCR實(shí)驗(yàn)室，由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)的集中安排，容易引起相互干擾，因此對整體布局和屏障系統(tǒng)有一定的要求。每個(gè)艙室在入口處設(shè)有緩沖室，以減少室內(nèi)和室外空氣交換。
　　一些經(jīng)驗(yàn)：
　　試劑制備室和樣品處理室應(yīng)略微正壓，以防止含有核酸氣溶膠的外界空氣進(jìn)入，造成污染；
　　通過將進(jìn)氣量控制為大于排氣量可以實(shí)現(xiàn)正壓效果。
　　核酸擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室應(yīng)處于輕微的負(fù)壓下，以防止含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出污染試劑和樣品，通過控制排氣量可以實(shí)現(xiàn)負(fù)壓效應(yīng)大于進(jìn)氣量。在理想情況下，可以在PCR實(shí)驗(yàn)室的緩沖室中設(shè)定正壓，使得室內(nèi)空氣不會(huì)流到室外，室外空氣不會(huì)流到室內(nèi)。
　　PCR實(shí)驗(yàn)室的進(jìn)氣口由原來的中央空調(diào)控制。需要將中央空調(diào)風(fēng)口安裝到指定的固定點(diǎn)，地面攤鋪后高度為2600mm。
　　如果使用熒光PCR機(jī)，則可以組合擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室。
　　如果允許房間深度，可以設(shè)置PCR內(nèi)部專用走廊。應(yīng)該注意的是，在減少室內(nèi)和室外空氣交換時(shí)，緩沖室比專用走廊更有意義。
　　各個(gè)地區(qū)之間應(yīng)該有單向的實(shí)驗(yàn)過程。、后勤、人流和氣流形成單向過程的保護(hù)屏障，避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠污染實(shí)驗(yàn)過程的錯(cuò)誤后果。
　　實(shí)驗(yàn)室的墻壁，包括天花板，在結(jié)構(gòu)上應(yīng)該是密不透的、；各個(gè)角應(yīng)采用圓弧線過渡；墻內(nèi)的墻壁干凈輕便、不吸收、耐腐蝕、易于清潔和消毒；地板材料應(yīng)滿足無間隙、無泄漏、光滑和清潔、耐腐蝕性要求。
　　PCR實(shí)驗(yàn)室主要設(shè)備
　　試劑準(zhǔn)備區(qū)
　　儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈站、采樣器、調(diào)音臺(tái)、天平和離心機(jī)等，采樣器除了特殊的、天平外，還應(yīng)有定時(shí)校準(zhǔn)
　　試劑應(yīng)放在干凈的工作臺(tái)中。混合物應(yīng)該在分子生物學(xué)課上。制備試劑后，應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量檢測：是否有污染。、是檢測試劑的擴(kuò)增效應(yīng)。
　　標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)
　　儀器設(shè)備主要有生物安全柜、采樣器、離心機(jī)、培養(yǎng)箱、攪拌機(jī)等。
　　擴(kuò)增區(qū)
　　擴(kuò)增區(qū)的主要儀器是核酸擴(kuò)增儀、超潔凈表、微量取樣器、離心機(jī)、可移動(dòng)紫外燈。儀器需要校準(zhǔn)。它配備了UPS電源，以防止停電對電壓波動(dòng)引起的放大效應(yīng)的影響。
　　分析區(qū)域
　　該區(qū)域使用的設(shè)備有一個(gè)酶標(biāo)儀、洗衣機(jī)洗衣機(jī)、采樣器和水浴等。潔凈實(shí)驗(yàn)區(qū)緩沖室的面積不能超過主實(shí)驗(yàn)室的八分之一，這是受監(jiān)管的。
　　一些瑣碎的、不可忽視的設(shè)計(jì)
　　1.實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)和壓力控制PCR實(shí)驗(yàn)室沒有嚴(yán)格的純化要求，但為了避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域之間存在交叉污染的可能性，建議使用全流量全流量氣流組織。同時(shí)，要嚴(yán)格控制排氣的比例為、，以保證每個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。
　　2.預(yù)防和控制污染
　　PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問題是如何避免污染。在實(shí)踐中，以下類型的污染是常見的：擴(kuò)增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑污染和試樣之間的污染。由于污染發(fā)生，必須停止實(shí)驗(yàn)直到找到污染源，并且必須丟棄實(shí)驗(yàn)結(jié)果并且需要重復(fù)實(shí)驗(yàn)。因此，在污染發(fā)生后，在實(shí)驗(yàn)室周圍浪費(fèi)尋找污染源不僅浪費(fèi)時(shí)間和麻煩，而且浪費(fèi)人力和資源。因此，為避免污染，應(yīng)首先進(jìn)行預(yù)防，而不是排除。
　　PCR實(shí)驗(yàn)室必不可少的嚴(yán)格管理
　　（1）嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員。與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的人員不得隨意進(jìn)入或離開實(shí)驗(yàn)室，必要時(shí)設(shè)置進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的獨(dú)立通道和門；
　　（2）盡量減少實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)不必要的移動(dòng)，以減少交叉污染的可能性
　　（3）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是擴(kuò)增產(chǎn)物污染的最重要來源。廢液不能傾倒在實(shí)驗(yàn)室中。必須將其浸入消毒劑溶液中并丟棄在遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室的地方。使用過的尖端是一次性的。材料也應(yīng)在消毒液中浸泡和消毒處理，如焚燒；
　　（4）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可能存在一些基因突變和有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。
　　3.5完整的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施完整的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是確保實(shí)驗(yàn)工作的必要條件。設(shè)備和儀器應(yīng)根據(jù)每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容配備，如超潔凈工作臺(tái)、離心機(jī)、取樣器等。
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